上海喆圖科學(xué)儀器
Zhetu Scientific Instrument
服務(wù)熱線：400-001-0304
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更新時間：2021-07-13
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一、效應(yīng)細胞的制備
激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結(jié)，100目鋼網(wǎng)研磨，調(diào)整細胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍色要求存活率>95%。
二、靶細胞的制備
P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續(xù)傳代培養(yǎng)，調(diào)整細胞濃度為2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2 mAb時的靶細胞濃度），臺盼藍染色成活率>95%。
三、LDH釋放法測定CTL的功能
按表1加樣于96孔培養(yǎng)板中，設(shè)3個復(fù)孔。混勻置二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔取上清液100μl，送全自動生化分析儀測定每孔的LDH含量。
表1 LDH釋放法測定CTL活性的加樣情況（μl）
| 分組 | 效應(yīng)細胞 | 靶細胞 | α-Lyt2 mAb | 1% Triton X-100 | *培養(yǎng)基 |
| 自然釋放孔 | 100 | 100 | |||
| 最大釋放孔 | 100 | 100 | |||
| 實驗孔1 | 100 | 100 | |||
| 實驗孔2 | 100 | 60① | 40 |
注：靶細胞濃度為3.33×105/ml 四、計算CTL活性 特異殺傷率(%)=(實驗孔LDH值-自然釋放孔LDH值)/(最大釋放孔LDH值-自然釋放LDH值)
五、統(tǒng)計學(xué)處理 DTH的測定，4組間比較采用方差分析，兩組比較采用q檢驗。對于CTL的特異殺傷率，先進行百分數(shù)的平方根反正弦轉(zhuǎn)換后采用方差分析進行4組間比較，兩兩比較采用q檢驗。 |
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