喆圖小編今天來講講細(xì)胞傳代的操作步驟：需要準(zhǔn)備的器材：酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)基、巴氏吸管、水浴鍋、移液器、離心管、超凈臺、CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)等。

     然后我們要把我們準(zhǔn)備的器材放入超凈臺，打開紫外殺菌燈滅菌，需要注意的是若培養(yǎng)的細(xì)胞對溫度比較敏感，將培養(yǎng)基瓶子放入37℃的水浴鍋中，使得培養(yǎng)基溫度在37℃，再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌，當(dāng)然一般的細(xì)胞對培養(yǎng)基的溫度不是很敏感，不用對培養(yǎng)基加溫也是可以的。細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時(shí)左右。

  接下來小編就開始來操作了，全程嚴(yán)格無菌操作！

  1、紫外照射滅菌后，穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。

  2、從CO2培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶到超凈臺。

  3、打開蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次，棄去PBS緩沖液。

  4、可用移液器加入2-3ml胰酶，“十字”晃動(dòng)，使胰酶充分接觸細(xì)胞。

  5、將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀察細(xì)胞消化情況，當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時(shí)，準(zhǔn)備終止消化，用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面，轉(zhuǎn)移到超凈臺

  6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基，終止消化。移液器充分吹打，使細(xì)胞能夠*脫落。

  7、將培養(yǎng)瓶中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中，配平，離心5分鐘左右。

  8、離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺，打開蓋子，將上清液倒入廢液缸。

  9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細(xì)胞懸液。

  10、將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)3個(gè)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子

  11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀察細(xì)胞情況，細(xì)胞應(yīng)保證一定數(shù)量，數(shù)量太少會(huì)影響生長情況。

  12、在培養(yǎng)瓶上做記號，注明傳代時(shí)間，細(xì)胞種類，操作人員等信息。在放入CO2培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

  以上內(nèi)容僅供參考，如需了解請聯(lián)系喆圖客服！